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伊势久生物葡萄糖氧化酶 GOD 检测试剂盒微量法 100T/48S 科研专用

价格	￥920/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	100T/48S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂葡萄糖氧化酶 GOD 检测试剂盒微量法 100T/48S
名称	生化试剂葡萄糖氧化酶 GOD 检测试剂盒微量法 100T/48S	货号	OX010
包装类型	盒	测定原理	GOD催化产生H2O2，过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在500
用途范围	生化研究	类别	生化试剂盒

葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒说明书

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理：

GOD催化产生H2O2，过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在500 nm有特征吸收峰，颜色深浅与GOD活性成线性关系。

组成：

产品名称	OX010-100T/48S	Storage
提取液：液体	100ml	4℃
缓冲液：液体	30ml	4℃
试剂一：粉剂	1瓶	-20℃
试剂二：粉剂	1瓶	-20℃
说明书	一份

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10ml缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10ml缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二的配制：参见试剂的组成和配制。

3、煮沸样本的准备：取200μl样本至新的EP管中，95℃水浴10min，冷却至室温后，8000g 4℃离心10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。

4、测定操作表

试剂（μl）	对照管	测定管
样本		50
煮沸样本	50
试剂一	75	75
试剂二	75	75

混匀，35℃保温15min后，于500nm波长处读取吸光度。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

GOD活力单位的计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

回归方程为y = 2.8348x - 0.0169；x为H₂O₂标准品浓度（μmol/ml），y为ΔA。

1、血清（浆）GOD活力的计算

单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/ml）= (ΔA 0.0169) ÷2.8348×V反总÷V样÷T×1000=58.8×(ΔA 0.0169)

2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA 0.0169) ÷2.8348×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA 0.0169)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/g鲜重）=(ΔA 0.0169) ÷2.8348×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T

=58.8×(ΔA 0.0169)÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/10⁴cell）=(ΔA 0.0169) ÷2.8348×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T

=0.118×(ΔA 0.0169)

V反总：反应体系总体积，0.125ml； V样：加入样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

回归方程为y = 1.4174x - 0.0169；x为H₂O₂标准品浓度（μmol/ml），y为ΔA。

1、血清（浆）GOD活力的计算

单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/ml）= (ΔA 0.0169) ÷1.4174×V反总÷V样÷T×1000=118×(ΔA 0.0169)

2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA 0.0169) ÷1.4174×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T

=118×(ΔA 0.0169)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/g鲜重）=(ΔA 0.0169) ÷1.4174×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T

=118×(ΔA 0.0169)÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H₂O₂为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/10⁴cell）=(ΔA 0.0169) ÷1.4174×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T

=0.235×(ΔA 0.0169)

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