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伊势久生物 二氢黄酮醇还原酶 DFR 检测试剂盒 微量法 100T/48S 科研专用

价格 3000/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 100T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂二氢黄酮醇还原酶 DFR 检测试剂盒 微量法 100T/48S
名称 生化试剂二氢黄酮醇还原酶 DFR 检测试剂盒 微量法 100T/48S 货号 AO020
包装类型 测定原理 二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化合物,在500nm处有特征吸收峰
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

二氢黄酮醇还原酶(Dihydro flavonol reductaseDFR)试剂盒说明书

微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理:

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化合物,在500nm处有特征吸收峰。

组成:

产品名称

AO020-100T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

12ml

4℃

试剂液体

1.5ml

4℃

试剂粉剂

1

4℃

试剂液体

30ml

4℃避光

说明书

一份

试剂三:临用前加2ml蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

自备仪器和用品:

研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。

酶液提取:

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至500nm

2、操作表

对照管

测定管

酶液(μl

40

40

试剂一(μl

140

120

试剂二(μl

20

试剂三(μl

20

20

混匀,30℃反应30min

乙酸乙酯(μl

200

200

37℃震荡10min,取上层溶液,N2吹干

无水乙醇(μl

100

100

充分震荡

试剂四(μl)

300

300

混匀,25℃静置10min,于微量石英比色皿/96孔板中测定500nm处吸光值A。分别记为A对照管和A测定管,△A=A测定管-A对照管

计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.0184x 0.0002R2=0.999

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义30℃pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性(mmol/min/mg prot=△A-0.0002÷0.0184×V反总÷V×Cpr÷T÷2

= 9.06×△A-0.0002÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义30℃pH7.5条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性(mmol/min/g 鲜重)= △A-0.0002÷0.0184×V反总÷V×W÷V样总)÷T÷2

= 9.06×△A-0.0002÷W

V反总:反应总体积,1mlV样:反应体系中样本体积,0.1mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW,样本质量,gT:反应时间,30min

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.0092x 0.0002R2=0.999

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义30℃pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性(mmol/min/mg prot=△A-0.0002÷0.0092×V反总÷V×Cpr÷T÷2

= 9.06×△A-0.0002÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义30℃pH7.5条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性(mmol/min/g 鲜重)= △A-0.0002÷0.0092×V反总÷V×W÷V样总)÷T÷2

= 9.06×△A-0.0002÷W

V反总:反应总体积,1mlV样:反应体系中样本体积,0.1mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW,样本质量,gT:反应时间,30min

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