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伊势久生物 多功能氧化酶 MFO 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S 科研专用

价格 1100/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂多功能氧化酶 MFO 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S
名称 生化试剂多功能氧化酶 MFO 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S 货号 AO032
包装类型 测定原理 MFO催化对硝 基苯甲 醚产生对硝 基苯酚,在400nm下有特征吸光值
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

多功能氧化酶((mixed function oxidaseMFO)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

多功能氧化酶又称混合功能氧化酶,可产生降解反应,可使原化学物质变为低毒的或无毒的物质从体内排出;还可产生激活反应,可使原化学物质转化为具有亲电子性质,导致毒性增强,成为致突变物或终致癌物。近年来对混合功能氧化酶系与外源性化学物质相互作用的深入研究,对于从分子生物学水平上进一步了解外源性化学物质的毒作用具有重要意义。

测定原理:

MFO催化对硝基苯甲醚产生对硝基苯酚,在400nm下有特征吸光值。

组成:

产品名称

AO032-50T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

30ml

4℃避光

试剂二:粉剂

3

4℃

试剂液体

30ml

4℃

试剂四:液体

80ml

4℃

说明书

一份

试剂二:粉剂×3管,-20℃保存;临用前取一管加入2ml水溶解,现配现用。

自备仪器和用品:

分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、氯仿。

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2、在10ml管中依次加入如下试剂

试剂名称(μl

测定

空白

试剂一

500

500

试剂二

100

100

提取液

400

900

样本

500

混匀,37℃水浴30min

试剂三

500

500

分别加入2.5ml氯仿,充分混匀萃取,静置10min,取下层氯仿层1.5ml至新的管中。再加入试剂四1.5ml,充分混匀萃取,取上层水相1ml1ml玻璃比色皿中,400nm下测定吸光值A测定与A空白,△A=A测定-A空白。空白管只需测一管。

MFO活性计算:

标准曲线:y = 0.0238x 0.0021R2= 0.9997y,吸光度;x,标准品浓度,单位nmol/ml

(1)按样本质量计算

单位定义:每g样本每分钟产生1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

MFOnmol/min/g 鲜重)=△A-0.0021÷0.0238×V÷(V÷V样总×W)÷T

=4.2×△A-0.0021÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

MFOnmol/min/mg prot=△A-0.0021÷0.0238×V÷(V×Cpr)÷T

=4.2×△A-0.0021÷Cpr

V总:最终萃取液体积,1.5 mlV样:反应中样品体积,500μlT:反应时间,30minW:样品质量,gCpr:样本蛋白浓度,mg/ml

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