伊势久生物 柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S 分光光度50T/24S 科研专用
价格 | ¥1300/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | CE009-25T/12S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S |
名称 | 生化试剂柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S | 包装类型 | 盒 |
测定原理 | CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸 | 用途范围 | 生化研究 |
货号 | CE009 | 类别 | 生化试剂盒 |
柠檬酸合酶(CS)检测试剂盒
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环第一个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理:
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。
组成:
产品名称 |
CE009-25T/12S |
CE009-50T/24S |
Storage |
试剂一:液体 |
25ml |
50ml |
-20℃ |
试剂二:液体 |
5ml |
10ml |
-20℃ |
试剂三:液体 |
0.5ml |
1ml |
-20℃ |
试剂四:液体 |
28ml |
55ml |
4℃ |
试剂五:粉剂 |
1瓶 |
1瓶 |
4℃ |
试剂六:粉剂 |
1支 |
1支 |
-20℃ |
说明书 |
一份 |
CE009-25T/12S试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入1.2ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;
CE009-50T/24S试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入2.4ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
①称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1ml试剂一和10μl试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g,4℃离心5min。
③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。
⑤在步骤④的沉淀中加入200μl试剂二和2μl试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂五中加入0.6ml无水乙醇和13ml试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(2)测定管:在EP管中加入40μl样本、880μl试剂五和40μl试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A1。
(3)对照管:在EP管中加入40μl样本、880μl试剂四和40μl试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A2。
(4)计算ΔA=A1-A2,每个测定管设一个对照管。
CS活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T=23.8×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0475×ΔA
V反总:反应体系总体积,9.6×10-4L;ε:TNB摩尔消光系数,1.36×104L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.04 ml;V样总:加入提取液体积,0.202 ml;T:反应时间,15 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。
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