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伊势久生物 柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S 分光光度50T/24S 科研专用

价格 1300/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 CE009-25T/12S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S
名称 生化试剂柠檬酸合酶 CS 检测试剂盒 分光光度25T/12S 包装类型
测定原理 CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸 用途范围 生化研究
货号 CE009 类别 生化试剂盒



柠檬酸合酶(CS)检测试剂盒

分光光度

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CSEC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环第一个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

组成:

产品名称

CE009-25T/12S

CE009-50T/24S

Storage

试剂一:液体

25ml

50ml

-20℃

试剂二:液体

5ml

10ml

-20

试剂三:液体

0.5ml

1ml

-20

试剂液体

28ml

55ml

4℃

试剂五:粉剂

1

1

4℃

试剂:粉剂

1

1

-20

说明书

一份

CE009-25T/12S试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入1.2ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

CE009-50T/24S试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入2.4ml蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

样本的前处理

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1ml试剂一和10μl试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

将匀浆600g4℃离心5min

弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g4℃离心10min

上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。

在步骤的沉淀中加入200μl试剂二和2μl试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

1)在试剂五中加入0.6ml无水乙醇和13ml试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

2测定管:在EP管中加入40μl样本、880μl试剂五40μl试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A1

3对照管:在EP管中加入40μl样本、880μl试剂四40μl试剂六,混匀,37℃反应15min后立即测定吸光值A2

4计算ΔA=A1-A2,每个测定管设一个对照管。

CS活性计算

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109W× V÷V样总)÷T=23.8×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。

CSnmol/min/104cell=[ΔA×V反总÷ε×d×109500×V÷V样总)÷T=0.0475×ΔA

V反总:反应体系总体积,9.6×10-4LεTNB摩尔消光系数,1.36×104L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.04 mlV样总:加入提取液体积,0.202 mlT:反应时间,15 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500万。

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