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伊势久生物 NADH氧化酶 NOX 检测试剂盒微量法100T/96S 科研专用

价格	￥900/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	100T/96S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂NADH氧化酶 NOX 检测试剂盒微量法100T/96S
名称	生化试剂NADH氧化酶 NOX 检测试剂盒微量法100T/96S	货号	CE012
包装类型	盒	测定原理	NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2，6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的
用途范围	生化研究	类别	生化试剂盒

NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）试剂盒说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。

测定原理：

NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

组成：

产品名称	CE012-100T/96S	Storage
试剂一：液体	100ml	-20℃
试剂二：液体	20ml	-20℃
试剂三：液体	1.5ml	-20℃
试剂四：液体	25ml	4℃
试剂五：粉剂	1瓶	-20℃
说明书	一份

试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5ml蒸馏水，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

①准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10μl试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g，4℃离心5min。

③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。

④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的NOX（此步可选做）。

⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200μl试剂二和2μl试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于NOX活性测定。

血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）试剂四于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、200μl试剂四和40μl试剂五，混匀，记录600nm处20s时吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

NOX活力单位的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）NOX活力的计算:

单位的定义：每ml血清（浆）在每ml反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX（U/ml）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织在每ml反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOX（U/10⁴cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.25ml； V样：加入样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，0.202 ml；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。

b.使用96孔板测定的计算公式如下：

1、血清（浆）NOX活力的计算:

单位的定义：每ml血清（浆）在每ml反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOX（U/ml）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=5000×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织在每ml反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOX（U/10⁴cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T=2.02×ΔA

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