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伊势久生物 NAD激酶 NADK 检测试剂盒微量法100T/48S 科研专用

价格	￥1200/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	100T/48S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂NAD激酶 NADK 检测试剂盒微量法100T/48S
名称	生化试剂NAD激酶 NADK 检测试剂盒微量法100T/48S	货号	CE014
包装类型	盒	测定原理	NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH
用途范围	生化研究	类别	生化试剂盒

NAD激酶（NAD kinase, NADK）试剂盒说明书

微量法100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD 磷酸化生成NADP 的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。

测定原理：

NADK催化NAD磷酸化，生成NADP；NADP可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；在340 nm下测定NADPH增加速率。可反映出NADK活性的大小。

组成：

产品名称	CE014-100T/48S	Storage
提取液：液体	100ml	4℃
试剂一：液体	10ml	4℃
试剂二：液体	25 ml	4℃
试剂三：粉剂	1瓶	-20℃
试剂四：粉剂	1瓶	-20℃
说明书	一份

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂一和试剂二37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min以上。

3、工作液Ⅰ的配制：在试剂三中加入5ml试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

工作液Ⅱ的配制：在试剂四中加入18ml试剂二，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

4、加样表

试剂名称(μl)	测定孔	对照管
样本	20	20
工作液Ⅰ	80
试剂一		80

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min，立即煮沸

2min（盖紧，防止水分散失）冰浴冷却，10000g，25℃离心10min，取上清

上清液	40	40
工作液Ⅱ	160	160

加完试剂混匀，室温静置15min，340nm下测定吸光值，ΔA=A测定-A对照。

NADK活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）NADK活力的计算:

单位的定义：每ml血清（浆）每分钟生成1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=53.59×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NADK活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V样÷V样总) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /10⁴cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.107×ΔA

V反总：反应体系总体积，1×10^-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，15 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）NADK活力的计算:

单位的定义：每ml血清（浆）每分钟生成1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=107.18×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NADK活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=107.18×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V样÷V样总) ÷T=107.18×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADP定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /10⁴cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.214×ΔA

V反总：反应体系总体积，1×10^-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L / mol /cm；d：96孔板光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，15 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。