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伊势久生物 谷氨酸合成酶 GOGAT 检测试剂盒 分光光度50T/48S 微量法100T/96S 科研专用

价格 700/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂谷氨酸合成酶 GOGAT 检测试剂盒 分光光度50T/48S
名称 生化试剂谷氨酸合成酶 GOGAT 检测试剂盒 分光光度50T/48S 货号 NM001
包装类型 测定原理 GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

谷氨酸合成酶(Glutamate synthaseGOGAT)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GOGAT分布于植物中,和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环,参与氨同化的调控。

测定原理:

GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸,形成两分子的谷氨酸;同时NADH氧化生成NAD 340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

组成:

产品名称

NM001-50T/48S

Storage

提取液:液体

60ml

4℃

试剂一:液体

60ml

4℃

试剂二:粉剂

2

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

1)工作液的配制:在试剂二中加入25ml试剂一充分溶解混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min现配现用(配好后3h内用完)

20.1ml样本和0.9ml工作液1ml比色皿中,混匀,加工作液的同时开始计时,在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1520秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2

GOGAT活性计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GOGATnmol /min/mg prot[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GOGATnmol /min /g 鲜重)[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W ×V÷V样总) ÷T=321×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GOGATnmol /min /104cell[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(500×V÷V样总) ÷T=0.642×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3LεNADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

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