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伊势久生物亚硝酸还原酶 NiR 检测试剂盒分光光度法50T/24S 微量法100T/48S 科研专用

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基本参数

纯度	/	规格	50T/24S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂亚硝酸还原酶 NiR 检测试剂盒分光光度法50T/24S
名称	生化试剂亚硝酸还原酶 NiR 检测试剂盒分光光度法50T/24S	货号	NM023
包装类型	盒	测定原理	亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少
用途范围	生化研究	类别	生化试剂盒

亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）试剂盒说明书

分光光度法 50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理：

亚硝酸还原酶可将NO₂^—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^—减少，即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

组成：

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加12ml蒸馏水溶解。

试剂三：液体12ml×1瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）

试剂四：液体25ml×1瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）

工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。

自备仪器和用品：

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1ml玻璃比色皿。

酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2．细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作表：

	空白管	对照管	测定管
样本（μl）		100	100
蒸馏水（μl）	100	200
试剂一（μl）	200		200
试剂二（μl）	200	200	200
混匀后，25℃反应1h
试剂三（μl）	200	200	200
充分震荡30S
上清液（μl）	350	350	350
工作液（μl）	700	700	700
充分混匀，蒸馏水调零，静置3min后测定540nm处吸光值，分别记为A空白管、A对照管、A测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。