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伊势久生物 糖化酶 Glucoamylase 检测试剂盒 分光光度法50T/24S 微量法100T/48S 科研专用

价格 580/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/24S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂糖化酶 Glucoamylase 检测试剂盒 分光光度法50T/24S
名称 生化试剂糖化酶 Glucoamylase 检测试剂盒 分光光度法50T/24S 货号 GMS064
包装类型 测定原理 在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化酶的活力
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

糖化酶(Glucoamylase)试剂盒说明书

分光光度法50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称γ-淀粉酶,是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性末端水解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键,将淀粉完全水解为葡萄糖,因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。

测定原理:

糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在540nm处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化酶的活力。

组成:

产品名称

GMS064-50T/24S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:液体

25ml

4℃

试剂二:液体

25ml

4℃避光

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

酶液提取:

1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体:直接检测。

测定操作:

对照管

测定管

样本(μl

50

灭活样本(μl

50

试剂一(μl

500

500

充分混匀,40℃反应20min

试剂二(μl

450

450

混匀,沸水浴5min,自来水冷却后,于1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定540nm处吸光值AA=A测定管-A对照管

酶活性计算公式:

标准曲线:y = 0.2164x - 0.0182R2 = 0.9992

1. 按照蛋白含量计算

酶活性定义40℃pH4.6条件下,每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

糖化酶活性(U/mg prot=A 0.0182÷ 0.2164×V反总÷V×Cpr÷T

= 2.54×A 0.0182÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

酶活性定义40℃pH4.6条件下,每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

糖化酶活性(U/g 鲜重)=A 0.0182÷ 0.2164×V反总÷W×V÷V样总)÷T

= 2.54×A 0.0182÷ W

3.按照液体体积计算

酶活性定义40℃pH4.6条件下,每毫升培养液每分钟分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

糖化酶活性(U/ml=A 0.0182÷ 0.2164×V反总÷V÷T

= 2.54×A 0.0182

4.按照细胞数量计算

酶活性定义40℃pH4.6条件下,每104个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。

糖化酶活性(U/104cell=A 0.0182÷ 0.2164×V反总÷V×细胞数量(万个)÷V样总)÷T

= 2.54×A 0.0182÷ 细胞数量(万个)

V反总:反应总体积,0.55mlV样:反应体系中加入样本体积,0.05mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW:样本质量,gT:反应时间,30min

注意事项:

1.灭活样本的制备建议将样本放在沸水浴中煮沸10min,以将酶彻底灭活。

2.测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样品用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

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