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伊势久生物 羟甲基戊二酰辅酶A合成酶 HMGCS 检测试剂盒 分光光度50T/48S 微量法 100T/96S 科研专用

价格 5200/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂羟甲基戊二酰辅酶A合成酶 HMGCS 检测试剂盒 分光光度50T/48S
名称 生化试剂羟甲基戊二酰辅酶A合成酶 HMGCS 检测试剂盒 分光光度50T/48S 货号 KC016
包装类型 测定原理 HMGCS催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,同时产生CoASH
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

羟甲基戊二酰辅酶A合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA

测定原理:

HMGCS催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,同时产生CoASH,使DTNB转化为黄色的TNB,在412nm下有特征吸光值。

组成:

产品名称

KC016-50T/48S

Storage

提取液:液体

60ml

4℃

试剂一:粉剂

1

-20℃避光

试剂二:粉剂

1

-20℃避光

试剂三:液体

15ml

4℃避光

说明书

一份

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃避光保存;临用前加入7ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存;临用前加入7ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

2、1 ml玻璃比色皿中加入125μl试剂一、125μl试剂二和250μl试剂三,混匀,加入500μl样本上清,迅速混匀后记录412nm下初始吸光值A14min后的吸光值A2。计算ΔAA2-A1

HMGCS活性计算:

1、血清(浆)活性

单位定义:每ml血清(浆)每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCSnmol/min/ml=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=36.76×ΔA

2、组织、细菌或细胞HMGCS活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCSnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCSnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109W ×V÷V样总)÷T=36.76×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算

单位定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmolTNB为一个酶活力单位。

HMGCSnmol/min/104cel)=[ΔA×V反总÷ε×d×109500×V÷V样总)÷T=0.074×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3LεTNB摩尔消光系数,1.36×104L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.5 mlV样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,4 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细胞或细菌总数,500万。

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