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伊势久生物 结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒 分光光度25T/24S 分光光度 50T/48S 微量法100T/96S

价格 2300/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 25T/24S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒 分光光度25T/24S
名称 生化试剂结合态淀粉合成酶GBSS检测试剂盒 货号 SA003
包装类型 测定原理 GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒


结合态淀粉合成酶(Granule-bound starch synthaseGBSS

试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GBSSEC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

测定原理:

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP 还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。

组成:

产品名称

SA003-25T/24S

SA003-50T/48S

Storage

提取液:液体

60ml×2

60ml×2

4

试剂一:液体

25ml

50ml

4

试剂二:粉剂

1

1

4

试剂:粉剂

1

1

4

试剂四粉剂

1

1

4

试剂五:液体

1

1

-20

试剂六:粉剂

1

1

-20

说明书

1

SA003-25T/24S试剂二临用前加入7ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-25T/24S试剂三临用前加入4ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-25T/24S试剂四临用前加入9ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-25T/24S试剂五临用前加入0.5ml蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-25T/24S试剂六临用前加入0.5ml蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-50T/48S试剂二临用前加入14ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-50T/48S试剂三临用前加入8ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-50T/48S试剂四临用前加入17ml试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-50T/48S试剂五临用前加入1ml蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

SA003-50T/48S试剂六临用前加入1ml蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

自备仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液制备:

称取0.1~0.2g组织(建议称取约0.1g组织),加入1ml提取液,冰浴中匀浆。10000g 4℃离心10min,弃上清,在沉淀中加入1ml提取液充分混匀,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称μl

测定管

样本

150

试剂二

270

混匀,30℃保温20 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却

试剂三

150

混匀,30℃保温30 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 4℃离心10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可将试剂四、五和六按比例配成混合液)

上清液

450

试剂四

300

试剂

15

试剂

15

混匀后立即340 nm波长下记录初始吸光度A12min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1

注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

GBSS活性计算

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V) ÷T×稀释倍数

=529×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W)÷T×稀释倍数

=529×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,7.8×10-4L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.15 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,2 min;稀释倍数:1.9Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量。

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