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伊势久生物 可溶性酸性转化酶 S-AI 检测试剂盒说明书 分光光度法 50T/24S 微量法 100T/48S 科研专用

价格 550/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/24S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂可溶性酸性转化酶 S-AI 检测试剂盒说明书 分光光度法 50T/24S
名称 生化试剂可溶性酸性转化酶 S-AI 检测试剂盒说明书 分光光度法 50T/24S 货号 SC011
包装类型 测定原理 S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝 基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒说明书

分光光度法 50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖转化酶(InvertaseIvr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pHIvr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。

AI的最适pH35AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AIB-AI)两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适 pH 4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

测定原理:

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。

组成:

产品名称

SC011-50T/24S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:液体

50ml

4℃

试剂二:粉剂

1

4℃

试剂三:液体

30ml

4℃

说明书

一份

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入25ml试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取提取:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤和加样表:

试剂名称(μl

测定管

对照管

样本

200

200

试剂一

800

试剂二

800

混匀, 37℃准确水浴30min后,95℃水浴10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂三

500

500

混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm处,蒸馏水调零,记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)ΔA=A测定-A对照

S-AI活性计算:

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001x为标准品浓度(μg/ml),y为吸光值。

1)按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA 0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA 0.001) ÷Cpr

2)按鲜重计算:

单位的定义:37℃g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA 0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA 0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.2mlV2:加入提取液体积,1mlT:反应时间,30minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本鲜重,g

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