伊势久生物 亚铁氧化酶 HP 检测试剂盒 分光法 50T/24S 微量法 100T/48S 科研专用
价格 | ¥850/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/24S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂亚铁氧化酶 HP 检测试剂盒 分光法 50T/24S |
名称 | 生化试剂亚铁氧化酶 HP 检测试剂盒 分光法 50T/24S | 货号 | OT016 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
亚铁氧化酶(Hephaestin,HP)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶,HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化Fe2 氧化生成Fe3 ,在介导铁的跨膜转运中有重要作用。
测定原理:
HP催化Fe2 氧化为Fe3 ,Fe2 和ferrozine反应显色,在560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2 的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。
试剂组成和配制:
产品名称 |
OT016-50T/24S |
Storage |
试剂一:液体 |
50ml |
4℃ |
试剂二:粉剂 |
3ml |
4℃ |
试剂三:粉剂 |
30ml |
4℃避光 |
说明书 |
一份 |
需自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):水ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml蒸馏水),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至560 nm,蒸馏水调零。
2、在玻璃比色皿中加入下列试剂:
试剂名称(μl) |
测定管 |
对照管 |
试剂一 |
250 |
250 |
试剂二 |
50 |
50 |
样本 |
50 |
50 |
蒸馏水 |
150 |
150 |
试剂三 |
混匀,40℃静置30 min |
500 |
试剂三 |
500 |
混匀,立即测定A对照和A测定,ΔA=A对照-A测定。(每个测定管需设一个对照管):
HP活性计算:
标准曲线:y = 16.427x - 0.0006,R2= 0.9998;(x为标准品浓度,μmol/ml;y为吸光值ΔA)
(1)按样本质量计算
单位定义:每g样本每分钟氧化1nmol Fe2 定义为一个酶活力单位。
HP(nmol/min/g 鲜重)=(△A 0.0006)÷ 16.427×V总÷T ÷(W× V样÷V样总)× 1000= 20.29×(△A 0.0006)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe2 定义为一个酶活力单位。
HP(nmol/min/mg prot)=(△A 0.0006)÷ 16.427×V总÷T ÷(Cpr×V样)× 1000= 20.29×(△A 0.0006)÷Cpr
V总:反应体系体积,0.1 ml;V样:加入样本体积0.01 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;1000,μmol到nmol的转换系数。
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