伊势久生物 丙酮酸脱羧酶 PDC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法 100T/96S 科研专用
价格 | ¥780/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂丙酮酸脱羧酶 PDC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S |
名称 | 生化试剂丙酮酸脱羧酶 PDC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S | 货号 | FA017 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+没有;通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算PDC活性 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
丙酮酸脱羧酶(pyruvate decarboxylase,PDC)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇发酵的关键酶之一,催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
测定原理:
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛,添加乙醇脱氢酶(ADH)来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD ;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD 没有;通过测定340 nm光吸收下降速率,来计算PDC活性。
组成:
产品名称 |
FA017-50T/48S |
Storage |
试剂一:液体 |
50ml |
4℃ |
试剂二:液体 |
36ml |
4℃ |
试剂三:液体 |
5ml |
4℃ |
试剂四:粉剂 |
1支 |
﹣20℃ |
试剂五:液体 |
60μl |
﹣20℃ |
试剂六:液体 |
5ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
混合试剂:临用前配制,将试剂四和试剂五转移至试剂三中充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μl试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率200W,工作3s,间歇10s,工作35次),16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2、组织处理:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆,16000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)等液体样品:直接检测。
PDC测定操作:
1. 分光光度计预热30min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃水浴中预热30 min。
3. 空白管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl蒸馏水、100μl混合试剂、700μl试剂二和100μl试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A1和A2。
4. 测定管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、100μl混合试剂、700μl试剂二和100μl试剂六,迅速混匀后于340nm比色,记录15s和75s的吸光值,分别记为A3和A4。
注意:空白管只需测定一次。
PDC活性计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(Cpr×V样) ÷T
=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中,每克组织每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min /g鲜重) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(W×V样÷V样总) ÷T
=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T
=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量
(4)按血清(浆)体积计算
活性单位定义:25℃中,每毫升血清(浆)每分钟催化1nmol NADH 氧化为1个酶活单位。PDC (nmol/min /ml) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×109}÷V样÷T
=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]
ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V总:反应体系总体积,1ml=0.001 L,V样:加入反应体系中上清液体积,0.1ml;Cpr:蛋白浓度(mg/ml),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒;W:样本质量,g ;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,1 min。
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联系人:
卢经理
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