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伊势久生物 磷脂酶C PLC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法100T/96S 科研专用

价格 4200/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂磷脂酶C PLC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S
名称 生化试剂磷脂酶C PLC 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 货号 FA027
包装类型 测定原理 磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝 基苯酚,在410nm处有特征吸收峰
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒


磷脂酶CPhospholipasesCPLC)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

磷脂酶CEC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

测定原理:

磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚,在410nm处有特征吸收峰。

组成:

产品名称

FA027-50T/48S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:液体

55ml

4℃

试剂二:液体

25ml

4℃避光

试剂三:液体

20ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

酶液提取:

1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃10000g离心5min,取全部上清于4℃100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃10000g离心5min,取全部上清于4℃100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。

3.血清:直接测定。

测定操作:

空白管

测定管

样品(μl

100

试剂一(μl

100

试剂二(μl

500

500

充分混匀,37℃反应30min

试剂三(μl

400

400

充分混匀,于1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定410nm处吸光值,分别记为A空白管和A测定管,A=A测定管-A空白管。

酶活计算公式:

标准曲线:y = 0.0191x - 0.0103R2= 0.9991

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot=A 0.0103÷ 0.0191×V反总÷(V×Cpr) ÷T

= 17.45×A 0.0103÷ Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g 鲜重)=A 0.0103÷ 0.0191×V反总÷(V÷V样总×W) ÷T

= 17.45×A 0.0103÷ W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/104cell=A 0.0103÷ 0.0191×V反总÷(V÷V样总×细胞数量) ÷T

= 17.45×A 0.0103÷ 细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/ml= A 0.0103÷ 0.0191×V反总÷V÷T

= 17.45×A 0.0103

V反总:反应总体积,1mlV样:加入样本体积,0.1mlV样总:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白浓度,mg/mlW:样本质量,gT:反应时间,30min

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