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伊势久生物 糖原合成酶 GCS 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S 微量法 100T/96S 科研专用

价格 1100/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂糖原合成酶 GCS 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S
名称 生化试剂糖原合成酶 GCS 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S 货号 GCS001
包装类型 测定原理 GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

糖原合成酶(Glycogen synthaseGCS)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GCSEC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,以α-14-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。

测定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD ,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

组成:

产品名称

GCS001-50T/48S

Storage

提取液:液体

60ml

4℃

试剂一:液体

45ml

4℃

试剂二:液体

5ml

4℃

试剂三:液体

41μl

4℃

试剂四:粉剂

1

-20℃

试剂五:粉剂

1

-20℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理:

按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3试剂五的配制:临用前在试剂五瓶中加入2.5ml试剂二充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

4将工作液和试剂五置于37℃预热5分钟。

51ml石英比色皿中加入50μl样本、50μl试剂五和900μl工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值A11min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2

注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.1,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

GCS活性计算:

1)按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCSnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCSnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W ×V÷V样总)÷T=3215×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,1×10-3LεNADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.05 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

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