伊势久生物 糖原磷酸化酶a GPa 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S 微量法 100T/96S
价格 | ¥800/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海舟福科贸有限公司
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主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂糖原磷酸化酶a GPa 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S |
名称 | 生化试剂糖原磷酸化酶a GPa 检测试剂盒 分光光度法 50T/48S | 货号 | GCS003 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa活性 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
糖原磷酸化酶a(Glycogen phosphorylase a,GPa)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。
测定原理:
未添加激活剂时,GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。
组成:
产品名称 |
GCS003-50T/48S |
Storage |
提取液:液体 |
60ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
40ml |
4℃ |
试剂二:粉剂 |
1瓶 |
-20℃ |
试剂三:粉剂 |
1支 |
-20℃ |
试剂四:粉剂 |
1支 |
-20℃ |
说明书 |
一份 |
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;
2、工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、试剂三的配制:临用前在试剂三瓶中加入2.5ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
4、试剂四的配制:临用前在试剂四瓶中加入2.5ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
5、将工作液、试剂三和试剂四置于37℃预热5分钟;
6、在1ml石英比色皿中加入50μl样本、50μl试剂三、50μl试剂四、50μl蒸馏水和800μl工作液,立即混匀,记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
GPa活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPa(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=643×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 ml;V样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g。
上海舟福科贸有限公司
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联系人:
卢经理
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