伊势久生物 磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法100T/96S 科研专用
价格 | ¥1400/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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所在地区:上海 上海市
主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S |
名称 | 生化试剂磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S | 货号 | PSS010 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | 340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
磷酸丙糖异构酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)
试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。
测定原理:
磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD在3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。
组成:
产品名称 |
PSS010-50T/48S |
Storage |
提取液一:液体 |
50ml |
4℃ |
提取液二:液体 |
50ml |
4℃ |
试剂一:液体 |
30ml |
4℃避光 |
试剂二:粉剂 |
1瓶 |
-20℃避光 |
试剂三:粉剂 |
1瓶 |
-20℃避光 |
试剂四:粉剂 |
1瓶 |
-20℃避光 |
说明书 |
一份 |
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿。
酶液提取
①总TPI酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体TPI酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆TPI酶活性,取沉淀加1ml提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中TPI酶活性。
建议测定总TPI酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的TPI,则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作:
1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2.取1ml石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A2-A1
计算公式:
(1)按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
TPI(nmol/min /mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
TPI(nmol/min /g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,1ml;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g
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太阳山路188弄2号101
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