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伊势久生物 磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法100T/96S 科研专用

价格 1400/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S
名称 生化试剂磷酸丙糖异构酶 TPI 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 货号 PSS010
包装类型 测定原理 340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

磷酸丙糖异构酶(Triose-phosphate isomeraseTPI

试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。

测定原理:

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

组成:

产品名称

PSS010-50T/48S

Storage

提取液液体

50ml

4℃

提取液液体

50ml

4℃

试剂一:液体

30ml

4℃避光

试剂二:粉剂

1

-20避光

试剂三:粉剂

1

-20避光

试剂四:粉剂

1

-20避光

说明书

一份

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿。

酶液提取

TPI酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃8000g离心10min,取上清测定。

胞浆和叶绿体TPI酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(ml)1510的比例(建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液一),冰浴匀浆后于4℃200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃8000g离心10min取上清用于测定胞浆TPI酶活性,取沉淀加1ml提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃8000g离心10min取上清测定叶绿体中TPI酶活性。

建议测定总TPI酶活性,按照步骤提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的TPI,则按照步骤提取粗酶液。

测定操作:

1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.1ml石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL粗酶液,充分混匀,记录340nm10s的吸光值A1310s的吸光值A2△A=A2-A1

计算公式:

1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

TPInmol/min /mg prot= ΔA÷ε×d×V反总÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

TPInmol/min /g 鲜重)= ΔA÷ε×d×V反总÷(W ×V÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,1mlεNADH摩尔消光系数,6.22×103L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1mlV样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

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