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伊势久生物谷胱甘肽S-转移酶 GST 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法100T/96S科研专用

价格 200/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂谷胱甘肽S-转移酶 GST 检测试剂盒 分光光度法50T/48S
名称 生化试剂谷胱甘肽S-转移酶 GST 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 货号 GSH009
包装类型 测定原理 GST催化GSH与CDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferaseGST)试剂盒说明书

分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

测定原理:

GST催化GSHCDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性。

组成:

产品名称

GSH009-50T/48S

Storage

试剂一:液体

50ml

4℃

试剂二:液体

45ml

4℃

试剂三:粉剂

1

4℃

说明书

一份

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加5 ml蒸馏水溶解。

自备仪器和用品:

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml石英比色皿和蒸馏水。

粗酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂三放在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)保温。

3. 测定管:取1ml石英比色皿,加入100μl上清液,900μl试剂二和100μl试剂三,迅速混匀后于340nm测定吸光度变化,记录10 s310 s吸光度为A1A2

GST活性计算公式:

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol/L CDNBGSH结合为1个酶活单位。

GSTnmol/min/mg prot=(A2A1))÷ε÷d×109×V反总÷(Cpr×V)÷T

=230×((A2-A1) ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:在25℃或者37℃中,每克样品每分钟催化1nmol/L CDNBGSH结合为1个酶活单位。

GSTnmol/min/g鲜重)=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷(W×V÷V样总)÷T

=230×(A2-A1) ÷W

3)按细胞数量计算

活性单位定义:在25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化1nmol/L CDNBGSH结合为1个酶活单位。

GSTnmol/min/104 cell=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷(细胞数量×V÷V样总)÷T

=230×(A2-A1) ÷细胞数量

4)按液体体积计算

活性单位定义:在25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol/L CDNBGSH结合为1个酶活单位。

GSTnmol/min/ml=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷V÷T

= 230×(A2-A1)

ε:产物摩尔消光系数,9.6×103L/mol /cmd:比色皿光径,1cm1061mol=1×106μmolV反总:反应体系总体积,1100μl=0.0011 LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/ml),需要另外测定,建议选用本公司生产的BCA蛋白质浓度测定试剂盒;V样:加入反应体系中上清液体积,100μl=0.1 mlV样总:加入提取液体积,1mlW,样本质量,gT:反应时间(min),5min

注意事项:

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;

2. 细胞中GST活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GST的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞;

3. 本法测定GST活性的线性范围可达76 μmol/min /L,测定前先用12个样做预实验,如5min内反应不成线性,须对样品用蒸馏水稀释,计算结果乘以稀释倍数;

4. 测定反映的温度对测定结果有影响,请控制在25℃或者37℃(哺乳动物)。

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