伊势久生物 γ-谷氨酰转肽酶 γ-GT 检测试剂盒 分光光度法50T/48S 微量法100T/96S 科研专用
价格 | ¥210/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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主营产品: 实验试剂,
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基本参数
纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂γ-谷氨酰转肽酶 γ-GT 检测试剂盒 分光光度法50T/48S |
名称 | 生化试剂γ-谷氨酰转肽酶 γ-GT 检测试剂盒 分光光度法50T/48S | 货号 | GSH017 |
包装类型 | 盒 | 测定原理 | γ-GT催化谷氨酰对硝 基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝 基苯胺 |
用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase, γ-GT)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
测定原理:
γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。
组成:
产品名称 |
GSH017-50T/48S |
Storage |
试剂一:液体 |
50ml |
4℃ |
试剂二:粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三:液体 |
10ml |
4℃ |
试剂四:液体 |
37ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
工作液(在试剂二瓶中配制):临用前配制,把试剂三倒入试剂二瓶中,充分溶解(室温过低时可以40℃水浴促进溶解);然后把试剂四倒入试剂二瓶中,混匀后室温保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml玻璃比色皿和蒸馏水
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心15min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
γ-GT测定操作:
1. 分光光度计预热30min,调节波长到405 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min(保证无沉淀)。
3. 测定管:取1ml玻璃比色皿,依次加入100μl上清液,900μl工作液,混匀后于405nm测定10 s和70 s时吸光度,记为A1和A2。
γ-GT活性计算公式:
标准曲线:y=0.006x 0.0016,x为对硝基苯胺浓度,y为吸光值,R2=0.999。
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/g 鲜重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每104个细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/104cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为1个酶活单位。
γ-GT(μmol/min/ml)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反总÷V样÷T
= 1.67 × [ (A2-A1)-0.0016]
V反总:反应体系总体积(L),1000μl=0.001 L;Cpr:蛋白浓度(mg/ml);V样:反应体系中加入上清液体积(ml),100μl=0.1 ml;V样总:加入提取液体积,1ml;W,样本质量,g;T:反应时间(min),1min。
注意事项:
1.培养细胞中γ-GT活性测定时,细胞数目须在300万-500万之间,细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。
2.配置好的工作液2周内使用完毕。
上海舟福科贸有限公司
联系人:
卢经理
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太阳山路188弄2号101
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