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伊势久生物氨基比林-N-去甲基酶 AND 检测试剂盒分光光度法 50T/24S 微量法 100T/48S 科研专用

价格	￥780/盒
起订量	≥1
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

纯度	/	规格	50T/24S
品牌	伊势久	产品名称	生化试剂氨基比林-N-去甲基酶 AND 检测试剂盒分光光度法 50T/24S
名称	生化试剂氨基比林-N-去甲基酶 AND 检测试剂盒分光光度法 50T/24S	货号	CP003
包装类型	盒	测定原理	AND催化氨基比林释放甲醛，通过Nash比色法测定甲醛含量，即可计算出AND活性
用途范围	生化研究	类别	生化试剂盒

氨基比林-N-脱甲基酶（AND）试剂盒说明书

分光光度法 50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

细胞色素P450酶是一组在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物，具有重要作用的酶系。AND作为P450酶系的重要一员，相当于CYP3A4亚型，与药物的去甲基化反应密切相关。

测定原理：

AND催化氨基比林释放甲醛，通过Nash比色法测定甲醛含量，即可计算出AND活性。

组成：

产品名称	CP003-50T/24S	Storage
试剂一：粉剂	1瓶	4℃
试剂二：液体	1瓶	4℃
试剂三：粉剂	1瓶	4℃避光
试剂四：粉剂	1瓶	4℃
试剂五：粉剂	1瓶	室温
试剂六：液体	1瓶	室温
试剂七：液体	1瓶	4℃
标准液：液体	1瓶	-20℃
说明书	一份

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加50ml蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1瓶（棕色瓶），4℃避光保存。临用前加入2.6ml无水乙醇，充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6ml蒸馏水，充分溶解。

试剂五：粉剂×1瓶，室温保存。临用前加蒸馏水10ml充分溶解。

标准液：液体×1瓶，-20℃保存。临用前取1.5mlEP 管，加入10μl标准液，加990μl蒸馏水，混匀即为0.05 mmol/L标准甲醛溶液，4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇和冰。

粗酶液提取：

1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，10000g 4℃离心30min，取上清液转入超速离心管。

2、粗制微粒体：4℃，10000g，离心60min，弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1ml试剂一，盖紧后充分震荡溶解，10000g离心30min，弃上清液。

4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5ml，盖紧后充分震荡溶解，即粗酶液，待测。该待测液需当天使用。

AND活性测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。

3. 对照管：取1支EP管，加入50μl粗酶液，850μl试剂二，50μl试剂三，50μl蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入175μl试剂五，混匀后置于冰浴中5min；取出后加入175μl试剂六，混匀后室温静置5min；室温8000rpm离心5min；取新的EP管，加入500μl上清液，500μl试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A对照管。

4. 测定管：取1支EP管，加入50μl粗酶液，850μl试剂二，50μl试剂三，50μl试剂四，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入175μl试剂五，混匀后置于冰浴中5min；取出后加入175μl试剂六，混匀后室温静置5min；室温8000rpm离心5min；取1支新EP管，加入500μl上清液，500μl试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A测定管。

5. 标准管：取1支EP管，加入500μl标准品，500μl试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A标准管。

注意：每个样品都需要做对照管。

AND活性计算：

(1).按照蛋白浓度计算:

活性单位定义：37℃中每分钟每毫克蛋白催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。

AND活性(nmol/min/mg prot)= C标准品×V标准品×（A测定管－A对照管）÷A标准管×稀释倍数÷（Cpr×V样）÷T

= 45×（A测定管－A空白管）÷A标准管÷Cpr

(2).按照样本质量计算:

活性单位定义：37℃中每分钟每克样品催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。

AND活性(nmol/min/g 鲜重)= C标准品×V标准品×（A测定管－A对照管）÷A标准管×稀释倍数÷(W×V样)÷T

= 45×（A测定管－A对照管）÷A标准管÷W

C标准品：0.05 mmol/L=50μmol/L；V标准品：500μl=0.0005 L；稀释倍数：V反总÷V上清液=（50 85050 50 175 175）÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白质浓度mg/ml，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入粗酶液体积，50μl=0.05ml；W：样本质量，g ；T：反应时间，30min。