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伊势久生物 双缩脲法蛋白含量测定系列试剂盒 分光光度法 50T/48S 微量法100T/96S 科研专用

价格 70/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 生化试剂双缩脲法蛋白含量测定系列试剂盒 分光光度法 50T/48S
名称 生化试剂双缩脲法蛋白含量测定系列试剂盒 分光光度法 50T/48S 货号 PDM001
包装类型 测定原理 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒

双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒说明书

分光光度法 50T/48S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定,确保蛋白浓度在110mg/ml范围内。

测定意义:

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析

测定原理:

强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质,适用于蛋白质浓度高的样品,尤其是动物材料

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

组成:

产品名称

PMD001-50T/48S

Storage

试剂一:液体

50ml

4℃

标准品:液体

1ml

4℃

说明书

一份

标准品:液体1ml×1瓶,5 mg/ml4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:

1.液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。

2.组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)冰浴匀浆,8000g4℃离心10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)

3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μl蒸馏水,1000μl试剂一,混匀后室温静置15 min,于540nm比色,记为A空白管。

3. 标准管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μl标准液,1000μl试剂一,混匀后室温静置15 min,于540 nm比色,记为A标准管。

4. 测定管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μl待测液,1000μl试剂一,混匀后室温静置15 min,于540nm比色,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

样品中蛋白质浓度计算公式

C待测(mg/mL= C标准管×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

=5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

注意事项:

1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内,低于1mg/ml不能用此法,高于10mg/ml须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验,确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。

2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,提取液中应不含这些物质;否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。

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