伊势久生物 快速碱性磷酸酶 300U 1000U 科研专用
| 价格 | ￥360/袋 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000袋 |
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 300U |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂快速碱性磷酸酶 300U |
| 名称 | 生化试剂快速碱性磷酸酶 300U | 包装类型 | 袋 |
| 储存条件 | -20℃ | 保质期 | 2年 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 分子生物系列 |
Alkaline Phosphatase (Fast)
REF: MN005
储运条件
-20℃ 保存。
产品组成
组分/规格 |
MN005S-300 U |
MN005M-1000 U |
Alkaline Phosphatase (Fast) (1 U/μl) |
300μl |
1ml |
10×AP Bu?er |
1ml |
2×1ml |
产品简介
Alkaline Phosphatase (Fast)（简称：Fast AP）可催化DNA、RNA以及核苷酸5"端和 3"端磷酸基团的水解，也能够去除蛋白磷酸基团，但不能催化磷酸 二脂及磷酸三脂的水解。在37℃的条件下作用10分钟，该酶即可 使所有类型DNA的末端去磷酸化。由于该酶在FastCut酶切 Bu?er中具有100%活性，且失活条件为80℃温育20分钟，因此与 FastCut快速内切酶进行“酶切-去磷酸化”反应时，可在同管内 完成，大大简化了实验流程。
酶活单位定义
37℃条件下， Fast AP缓冲液环境中，10 min内能够将1 μg线 性化pUC57 DNA的5"末端去磷酸化所需要的酶量定义为1个活性 单位（U）。
质量控制
核酸内切酶残留测试
37℃条件下，将10 U Fast AP 加入到1 μg pUC19 DNA 中温育 4 h，未检测出由共价闭合环状 DNA 转变为带有缺刻的 DNA。
核酸外切酶残留测试
将酶液与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过DNA电泳 检测双链DNA底物无变化。
蓝白斑测试
室温条件下，使用30 U的Fast T4 DNA Ligase连 接pUC57 DNA/HindIII，pUC57 DNA/PstI及pUC57 DNA/SmaI消 化产物1 h，然后用E.coli XL1-Blue感受态细胞转化连接产物，检测到少于1%的白斑。
使用方法
1. 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 |
使用量 |
质粒DNAa |
1 μg |
10× FastCut Bu?er |
2μl |
FastCut限制性内切酶 |
1μl |
Fast AP |
1U（1μl） |
ddH2O |
To 20 μl |
a.为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。
② 充分混匀并瞬离，37℃温育15~30 min。
注：如果延长温育时间，可能产生星号活性。
③ 80℃温育20 min，以终止反应。
2.核苷酸去磷酸化的实验流程
该方案适用于去除DNA的3"和5"端磷酸基团。
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 |
使用量 |
线性DNA |
1 μg |
10× AP Bu?er |
2μl |
Fast AP |
1U（1μl） |
ddH2O |
To 20 μl |
② 充分混匀并瞬离，37℃温育10 min。
③ 80℃温育20 min，以终止反应。
3. 蛋白质去磷酸基团的实验流程
① 于冰上配制如下反应体系：
试剂 |
使用量 |
10×FastCut Bu?er |
2μl |
磷酸化蛋白质 |
2~4 μg(终浓度0.1~0.2 mg/ml) |
Fast AP |
10U（10μl） |
ddH2O |
To 20 μl |
② 充分混匀并瞬离，37℃温育1h。
③ 添加EDTA至50 mM的终浓度，或者添加钒酸钠（Na3VO4）至 10 mM的终浓度，以终止反应。
注：：以上为蛋白质去磷酸基团的反应体系和实验流程的举例，实验时请根据 具体底物类型调整Fast AP的使用量以及最佳温育时间。
注意事项
与Fast AP结合的DNA在琼脂糖凝胶中可能会出现条带偏移 或弥散，为避免此现象，可在样品中加入混有SDS的6× Loading Bu?er，先在80℃温育20 min，冰浴降温后再进行电泳。
上海舟福科贸有限公司
联系人：
卢经理
服务热线：
딩ꥃ뤠뤠ꉤ딩뤠
公司地址：
太阳山路188弄2号101
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