氨基磁珠氨基磁性微球1微米
价格 | ¥9999/支 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 江苏 苏州 | 可售量 10000支 |
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Homo-NH2均匀的、但分散的表面具-NH2官能团的超顺磁微粒,由Fe3O4核和GMA涂层组成。通过GMA修饰,-NH2基团通过短的亲水性连接臂连接到磁珠上。亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性和易操作性。表面具有反应性胺基的磁珠允许配体如蛋白质、肽、碳水化合物或其它特异性分子的固定。配体的固定可通过醛或酮的还原胺化而不预先活化磁珠表面。或者,EDC交联剂可用于羧基将配体与胺偶联。最后,胺反应性双功能交联剂用于引入其它官能团以偶联配体。
1. HomoS-NH2
基团密度 600 umoles amine/g beads
2. HomoL- NH2
基团密度 300 μmoles amine/g beads
直径:1μm
常温运输,正确使用保存期一年。
方案1.用于连接醛和酮
p class="MsoNormal" align="left" background-color:#ffffff;text-indent:18pt;"="" style="box-sizing: border-box; margin-top: 0px; margin-bottom: 0px; color: rgb(51, 51, 51); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, Segoe UI, Roboto, Helvetica Neue, Arial, Noto Sans, sans-serif, Apple Color Emoji, Segoe UI Emoji, Segoe UI Symbol, Noto Color Emoji; background-color: rgb(255, 255, 255);"含有醛和酮的配体可通过形成Schiff"s碱与氨基磁珠偶联,并用氰基硼氢化钠还原胺化。醛基可通过高碘酸钠氧化糖蛋白中的糖残基或多糖中相邻羟基的C-C键的裂解而容易地制备。
缓冲液
5M Sodium Cyanoborohydride in 1M NaOH;
1. 彻底重悬氨基磁珠并转移足量磁珠到干净EP管中。磁分离,并吸弃上清液。从磁力架上取下EP管,加入200μl偶联缓冲液重悬磁珠。磁分离,并吸弃上清液。
1. 将配体溶解偶联缓冲液中至浓度1-10 mg/ml。
3. 每100μl反应混合物中加入1μl的5M氰基硼氢化钠(溶于1M NaOH溶液),室温下孵育2小时。磁分离,并吸弃上清液。
5. 加入适量的PBS并混匀磁珠。磁分离,吸弃上清液。
最常见的一类活化剂是NH。根据交联剂的性质,可与待固定的配体中的化学基团反应,包括胺、巯基、羧基和羟基以及非选择性光反应。NHS交联剂通常必须在使用前新配。与待固定的配体量相比,使用10倍摩尔过量。
偶联缓冲液Coupling Buffer(0.1 M sodium phosphate buffer with 0.15 M NaCl, pH 7.4);
1. 彻底重悬氨基磁珠并转移足量磁珠到干净EP管中。磁分离,并吸弃上清液。从磁力架上取下EP管,加入200μl偶联缓冲液重悬磁珠。磁分离,并吸弃上清液。
1. 用偶联缓冲液重悬氨基磁珠。
2. 根据说明溶解NHS,并将所需体积加入磁珠,混匀。可将水溶性NHS直接加入磁珠中。终体积应等于瓶中最初的液体体积。
4. 磁珠活化完成。
方案2-1.用-NH2反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联
1. 重新悬浮活化的氨基磁珠。使用相同的缓冲液将体积调整到所需的磁珠浓度。
3. 室温下孵育30分钟或4°C下缓慢倾斜旋转2小时。
5. 加入0.05M 的Tris(pH7)并在室温下温育15分钟以猝灭未反应的活性氨基。
巯基活性基团通常是吡啶二硫基或碘代/溴代乙酰基。寡核苷酸也可使用马来酰亚胺。适当的缓冲液和孵育条件与巯基反应,配体须含待固定的游离巯基。
2. 加入计算量的游离巯基配体,涡旋混匀。
4. 孵育后,可加入半胱氨酸至终浓度为5mM以淬灭未反应基团。室温下孵育15分钟。
SH-reactive group |
Recommended buffer |
Recommended condition |
Maleimide |
0.1M sodium phosphate pH 6.5-7.5 |
4 h at 4℃ or 2 h at room temperature |
Iodo/Bromoacetyl |
0.05M sodium borate pH8.3 |
1h, room temperature. Protect from light. |
Pyridyldithio |
Phosphate buffered saline (PBS) pH7.5 |
Over night at room temperature |
方案2-3.用光反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联
1. 重新悬浮活化的氨基磁珠。根据活性基团选择缓冲液。用相同缓冲液将体积调整到所需的磁珠/配体浓度。
3. 使用推荐的时间、温度、适当波长的光照射。
3. 将偶联的磁洗两次。
在配体中不存在其他伯氨基的条件下,可通过使用EDC或EDC / NHS(或其它碳二亚胺)将磁珠表面的胺基和配体中的羧基连接在一起。 EDC与羧基反应形成胺反应性中间体,该中间体在水溶液中不稳定。为了稳定,可引入NHS。
缓冲液
注意:对于使用EDC的偶联反应,避免使用含游离胺或磷酸盐的缓冲液,因为这会干扰偶联效率。Tris,乙酸盐和甘氨酸缓冲液都易与EDC或偶联中间体反应。还应避免含硫醇缓冲液,因为它们不可逆地结合EDC并抑制偶联。
Sulfo-NHS or N-hydroxysuccinimide (NHS);
PBS;
偶联羧基配体
2. 将配体溶解在上述偶联缓冲液中至1–10 mg / mL的浓度,并加入推荐量的配体至上述磁珠,移液器吹打混匀。
4. 注:EDC溶液和NHS溶液应新配,避光保存在冰上。
6. 在室温下孵育2h,或在4°C下缓慢倾斜旋转孵育2h。
封闭磁珠
2. 将EP管置于磁力架上60秒,并吸弃上清液。
4. 加入500μL的PBS(pH7.4)重悬磁珠。将EP管置于磁力架60秒,并吸弃上清液。重复洗涤2次。
附录1:
1. 将至少100μl含有靶抗原的细胞裂解物样品加入到来自步骤6的磁珠管中并涡旋10秒。
3. 采用SDS-PAGE和蛋白质印迹分析,加入适量的SDS-PAGE上样缓冲液并在95°C加热磁珠5分钟。将磁珠/上样缓冲液混合物直接加到SDS-PAGE凝胶上,并按正常进行电泳和印迹。
B.抗体和抗原的排除:向磁珠、抗体、抗原混合物中加20μl洗脱液重悬磁珠。室温下孵育2min。磁分离,收集上清液到新EP管,加入2μl中和缓冲液(如1M Tris-HCl,pH8.5)调pH。
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