苏州北科纳米科技有限公司

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氨基磁珠高密度氨基磁珠聚合物氨基磁性微球G-NH2aminemagneticbead

价格	￥9999/支
起订量	≥1
所在地	江苏苏州	可售量 10000支

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基本参数

纯度	99%	规格	支/盒
包装	支/盒	粒径	支/盒
磁核	支/盒	壳层	支/盒
磁性类型	支/盒	浓度	支/盒

氨基磁珠（G-NH2）是具有-NH2表面官能团的超顺磁微球，由Fe3O4核和GMA涂层组成。通过GMA的化学修饰，-NH2基团通过短的亲水性连接臂连接到氨基磁珠上。亲水表面确保氨基磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性和易操作性。具有表面反应性胺基的磁珠允许配体如蛋白质、肽、碳水化合物或其它特异性分子的固定。配体的固定可以通过醛或酮的还原胺化而不预先活化氨基磁珠表面。或者，EDC交联剂可用于羧基将配体与胺偶联。最后，胺反应性双功能交联剂可用于引入其他官能团以偶联配体。

1. 短臂氨基磁珠 GS-NH2

基团密度 600 umoles amine/g beads

2.长臂氨基磁珠GL- NH2

氨基密度 300 μmoles amine/g beads

直径：200 nm

常温运输，正确使用保存期一年。

方案1.用于连接醛和酮

含有醛和酮的配体可通过形成Schiff"s碱与氨基磁珠偶联，并用氰基硼氢化钠还原胺化。醛基可通过高碘酸钠氧化糖蛋白中的糖残基或多糖中相邻羟基的C-C键的裂解而容易地制备。

缓冲液

? 5M Sodium Cyanoborohydride in 1M NaOH;

1. 彻底重悬氨基磁珠并转移足量磁珠到干净EP管中。

3. 从磁力架上取下EP管，加入200μl偶联缓冲液并重悬氨基磁珠。

5. 用上述缓冲液清洗两次。

配体的结合

2. 将适量的配体加入洗过的氨基磁珠并混匀。

4. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

6. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

8. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

最常见的一类活化剂是NH。根据交联剂的性质，可与待固定的配体中的化学基团反应，包括胺、巯基、羧基和羟基以及非选择性光反应。NHS交联剂通常必须在使用前新配。与待固定的配体量相比，使用10倍摩尔过量。

缓冲液

? 0.05 M Tris, pH 7;

清洗氨基磁珠

2. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

4. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

1. 用偶联缓冲液重悬氨基磁珠。

2. 根据制造商的说明溶解NHS，并将所需体积加入磁珠，混匀。可将水溶性NHS直接加入磁珠中。最终体积应等于小瓶中最初的液体体积。

4. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。用上面的缓冲液洗两次。

使用同双功能交联剂时，第二个NHS-酯基团将与配体中的-NH2反应，因此通常用于固定肽或蛋白质的N-末端。步骤如下：

2. 加入计算后一定量的配体，混匀。

4. 孵育后，将试管置于磁铁上2分钟，取出上清液。

6.用偶联缓冲液洗涤磁珠两次。

方案2-2.用-SH反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联

1. 重新悬浮活化的磁珠。根据所选的巯基反应基团使用缓冲液（请参见下表）。使用相同的缓冲液将体积调整到所需的磁珠/配体浓度。

3. 按下表推荐的时间和温度孵育。

5.如所述洗涤偶联的磁珠。

SH-reactive group	Recommended buffer	Recommended condition
Maleimide	0.1M sodium phosphate pH 6.5-7.5	4 h at 4℃ or 2 h at room temperature
Iodo/ Bromoacetyl	0.05M sodium borate pH8.3	1h, room temperature. Protect from light.
Pyridyldithio	Phosphate buffered saline (PBS) pH7.5	Over night at room temperature

方案2-3.用光反应性的NHS-酯交联剂活化后偶联

1. 重新悬浮活化的氨基磁珠。根据活性基团选择缓冲液。用相同缓冲液将体积调整到所需的磁珠/配体浓度。

3. 使用推荐的时间、温度、适当波长的光照射。

4.将偶联的磁洗两次。

在配体中不存在其它伯氨基的条件下，通过使用EDC或EDC / NHS（或其他碳化二亚胺）可将磁珠表面的胺基和配体上的羧基偶联。 EDC与羧基反应形成胺反应性中间体。羧基的EDC活化产生非常不稳定的中间体，迅速水解，因此配体需快速添加。或者，可使用NHS的两步法方案来产生较稳定的中间体在较长时间内反应。这两种方法的方案如下。

缓冲液

注意：对于使用EDC的偶联反应，避免使用含游离胺或磷酸盐的缓冲液，因为这会干扰偶联效率。Tris，乙酸盐和甘氨酸缓冲液都易与EDC或偶联中间体反应。还应避免含硫醇缓冲液，因为它们不可逆地结合EDC并抑制偶联。

Sulfo-NHS or N-hydroxysuccinimide (NHS);

PBS;

清洗氨基磁珠

2. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

4. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

1. 用偶联缓冲液配制50 mg/ml的EDC溶液；用偶联缓冲液配制50 mg/ml的sulfo-NHS或NHS溶液。

2. 将60μl的偶联缓冲液、20μl的EDC溶液和20μl的NHS溶液加入洗好的磁珠中，混匀。

4. 将EP管置于磁力架上60秒，并吸弃上清液。

6. 在室温下倾斜旋转30分钟或在4°C过夜孵育。

8. 加入100μl的偶联缓冲液并重悬磁珠。